导致ELISA试验操作失败的主要原因

一般ELISA试验要做阴阳性对照，和质控品，这些对照品和质控品可以说明一部分问题。如果对照品成立，只是方法的指标不好导致失败要分析检测过程的控制。如果对照品标准品都很好，单独样品测定失败，要考虑样品基质和样品制备的问题。 ELISA测定中影响要素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在查验中除正常反响外，有时常可见到一些过错结果(即假阳性或假阴性)，那么致使试验不成功的主要原因有哪些？

一、标本的影响：

溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易发生假阳性。或许是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋 白中的亚铁血红素)，在洗刷过程中往往难以*洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，发生假阳性。所以严峻溶血标本禁用。  

二、标本受细菌污染：

因菌体中或许含有内源性辣根过氧化物酶，因而，被细菌污染的标本同溶血标本相同，亦可发生非特异性显色而搅扰 测定结果。

三、标本保存不妥：

在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、形成假阳性；为克服上述搅扰，ELISA试剂盒测定 的血清标本宜为新鲜收集；如不能立即测定，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存； 冻存后融解的标本，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充沛混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振动。    

四、标本凝结不全：

在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易形成假阳性结果；因而血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清。