汉坦病毒RT‑PCR定量检测过程

汉坦病毒的RT‑PCR定量检测方法:取汉坦病毒的S基因序列设计PCR扩增引物和探针，取汉坦病毒以COS‑1细胞作为宿主细胞并提取RNA，对制备的cDNA产物的S基因片段进行PCR扩增，将PCR扩增产物连接至pMD18‑T载体中，构建重组质粒并抽提，确定抽提的重组质粒的拷贝数，经稀释后获取多个浓度的标准品，取多个所述标准品采用实时荧光定量PCR程序进行扩增，经荧光检测得到Ct值，以Ct值和标准品的浓度值为坐标建立标准曲线。
汉坦病毒进行定量测定，建立起敏感特异的检测汉坦病毒载量的方法，操作简单、反应时间短、成本低等优点，特别适用于在临床及科研学研究中的开展。