过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书

                                                         
过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书 
                                                                      分光光度法  50 管/48 样 
测定意义：                            
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是zui主要的 H2O2清除酶，
在活性氧清除系统中具有重要作用。 
测定原理： 
H2O2在 240nm下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H2O2，使反应溶液 240nm下的吸光度随反
应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT活性。 
需自备的仪器和用品： 
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水 
试剂组成和配制： 
提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 
试剂一：60mL×1瓶，4℃保存； 
试剂二：100 uL×3瓶，4℃保存。 
粗酶液提取： 
1、细菌、细胞或组织样品的制备： 
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104
个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细菌或细胞加入 1mL提
取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声 3s，间隔10s，重复30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，
加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 
2、血清（浆）样品：直接检测。 
测定步骤： 
1、分光光度计预热 30min以上，调节波长至 240nm处，蒸馏水调零。 
2、CAT检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二（100 uL）中加入 20mL试剂一，充分混匀，
作为工作液；用不完的试剂 4℃保存一周； 
3、测定前将 CAT检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min。 
4、取 1mLCAT检测工作液于 1mL石英比色皿中，再加入35μL样本，混匀；室温下立即测
定 240nm下的初始吸光值 A1和 1min后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2 
CAT 活性计算： 
1、血清（浆）CAT活力的计算: 
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT(U/mL)= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷V样÷T=678×ΔA 
2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算： 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：每 mg组织蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(V样×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g组织每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(W× V样÷V样总)÷T=678×ΔA÷W 
（3）  按细菌或细胞密度计算：                                                          
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 
CAT(U/104 
cell)＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷（500×V样÷V样总）÷T =1.356×ΔA 
V反总：反应体系总体积，1.035×10-3
 L；ε：H2O2摩尔消光系数，4.36×104
 L / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.035 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总
数，500 万。