BIM解析：ELISA试剂盒的样本处理大全

可用作ELISA测定的标本十分广泛，比如体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。
   制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血的块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
   血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。下面上海恒远生物就样本处理作出介绍：

一、匀浆介质  一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。 

二、组织匀浆的制备  

1、取组织块（0.2g～0.5g）zui少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。 

2、按重量(mg):体积(ml)=1:9的比例加入4倍体积的匀浆介质于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。  

3、匀浆的方式：手工匀浆，机器匀浆。  ① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成20%的匀浆液。  ② 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成20%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行,可适当延长匀浆时间），  镜检观察:取少量组织匀浆作涂片（直接涂片、染色均可以），显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀 浆时间。  

4、将制备好的20%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机4000转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定. 

三、样本保存:        

  植物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如*冻融，-20℃以下可保 存三个月,-70℃以下可保存六个月。         

  制备好的匀浆液建议不要冻存,当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指 标4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,总蛋白测定可存5～7天等)

ELISA 检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠 性，在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的 计划。