分离细胞膜蛋白方法

 1. 细胞放在冰上，去除上清，用pH7。4的冷磷酸盐缓冲液洗涤单层细胞两次。

2. 加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min。
3. 刮下单层细胞，4度下10 000g 5min离心。
4. 溶液37度水浴 10min以分离水相和去污剂相，然后37度下2 000g离心5min。
5. 收集水相留作分析。
6. 用500ul冰冷的buffer C溶解去污剂相沉淀，冰浴2min后加温，在按步骤6再次离心。
7. 按步骤8再次抽提去污剂相，用buffer C将洗涤后的去污剂相稀释到初始体积。
8. 用等量的buffer A分别稀释水相与去污相，并进行免疫沉淀实验。